免疫原性是生物指藥物刺激機體形成特異性抗體或致敏淋巴細胞的性質，在生物技術藥物研發中，技术检测進行免疫原性檢測是药物原性一項重要工作。對於病人來說，免疫免疫原性會影響藥物的浅析安全和有效性，甚至會因為抗藥抗體和內源蛋白交叉給病人帶來生命危險，生物而對於企業來說免疫原性檢測不好，技术检测倘若到了臨床才發現抗藥抗體問題，药物原性會增加企業研發風險和損失。免疫那麽常用的浅析免疫原性檢測方法有哪些呢？

1、ELISA-橋法

對抗體藥物進行免疫原性檢測是生物生物技術藥物申請臨床試驗和注冊的重要內容，盡管已有的技术检测動物試驗顯示免疫原性不一定會在人體內產生預期的免疫反應，但對藥物免疫反應的药物原性評價仍顯得十分重要。將抗原或抗體固定的免疫過程稱為包被，換言之，浅析包被即是抗原或抗體結合到固相載體表麵的過程。ELISA-橋法包被藥物，用標記的藥物檢測。此法的優點是能檢測各類抗體亞型，無種屬特異性，可高通量檢測，缺點是不易檢測到低親和力的抗體，包被或標記時可能會掩蓋或改變藥物的抗原表位，易受藥物本身的幹擾。美迪西提供免疫原性檢測服務，主要使用小鼠、大鼠、豚鼠、兔、犬、非人靈長類動物做免疫原性毒性試驗。

2、ELISA-直接法

抗體的包被一般均采用直接吸附法，蛋白質抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。ELISA-直接法包被藥物，用標記抗體檢測。ELISA-直接法用於免疫原性檢測的優點是可能會增加檢測低親和力抗體的能力，且高通量。然而當抗原決定簇存在於或鄰近於疏水區域時，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露，在這種情況下，直接包被效果不佳，可以采用間接的捕獲包被法。而且直接包被時可能會掩蓋或改變藥物的表位，僅檢測單一亞型，有種屬特異性，多次洗滌時丟失低親和力抗體，參考品與樣本之間試劑可能不同。

3、ELISA-間接法

ELISA-間接法包被單抗或生物素，再加藥物，即先將針對該抗原的特異抗體作預包被，其後通過抗原抗體反應使抗原固相化。此間接結合在固相上的抗原遠離載體表麵，其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經固相抗體的親和層析作用，包被在固相上的抗原純度大大提高，因此含雜質較多的抗原也可采用捕獲包被法，試驗的特異性、敏感性均由此得以改善，重複性亦佳。間接包被的另一優點是抗原用量少，僅為直接包被的1/10乃至於/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質抗原可采用特殊的包被方式。

4、放射免疫分析法（RIA）

RIA 是一種微量分析法，就是利用放射性核素標記抗原或抗體，然後與被測的抗體或抗原結合，形成抗原抗體複合物的原理來進行分析的。它兼有放射性同位素的靈敏性和抗原、抗體反應的特異性兩大特點。該法還具有準確性高和精密度好，便於標準化以及操作簡便、經濟等優點。由於RIA具有靈敏度高、特異性強、測量簡單和成本低等優點，RIA在應用方麵具有一定的生命力。但是，又因為它最致命的弱點就是使用放射性核素，此外標記物有效使用時間短，難以實現操作和測量的自動化等，它的進一步發展受到一些局限。現在免疫分析技術都在朝著非同位素標記免疫分析的方向發展。

5、電化學發光法（ECL）

電化學發光法（ECL）源於電化學法和化學發光法，不僅可以應用於所有的免疫測定，而且還可用於DNA／RNA探針檢測。它的優點是液相法，可檢測各種抗體亞型，無種屬特異性、高通量，可使用高濃度基質，檢測表麵積大和信號穩定。缺點是需製備2種標記物（生物素和TAG），標記物分子的表位可能會變化或標記過程會改變分子，所用試劑通用性差。

6、表麵等離子體共振

表麵等離子體共振法的優點是液相法，不需結合物（酶標記抗體），能檢測到不同親和力的抗體和各亞型抗體，無種屬特異性。缺點是化學連接可能會影響分子，與葡聚糖連接影響表位的暴露，複性可能會使分子降解，所用試劑通用性差，低通量，如果產生的抗體是藥物同種亞型的抗體，要證實一種人源化抗體的抗抗體反應比較困難，靈敏度低。

7、酶聯免疫斑點法（ELISpot）

酶聯免疫斑點法（ELISpot）的原理與ELISA類似，也是檢測細胞產生的細胞因子或其他可溶性蛋白的方法，它不僅能測定細胞因子量，還可通過計數檢測分泌此細胞因子的細胞頻率，靈敏度高於ELISA，而且實驗采用的捕獲抗體不會影響活化細胞分泌細胞因子。缺點是比ELISA技術複雜而費時，需嚴密控製實驗條件，操作人員需技術熟練，並能對實驗結果進行分析，以減少實驗偏差；屬半定量方法。

8、免疫PCR法（IPCR）

免疫PCR法（IPCR）是在ELISA的基礎上建立起來的，用PCR擴增代替ELISA的酶催化底物顯色。PCR具有很強的放大能力，可以定量地檢測DNA和RNA，具有非常高的靈敏度和特異性，因此，將與抗原結合的特異抗體通過連接分子與DNA結合，再經PCR擴增定量檢測抗原使得IPCR的靈敏性高於ELISA。與對應的ELISA比較，IPCR至少可使抗體檢測的靈敏度提高1000倍，而且該法中僅僅采用稀釋的方法就可以消除生物樣品中基質的幹擾。

目前報道的IPCR均采用待檢抗原直接吸附固相，因此固相的均質性對結果有很大的影響；同時檢測的樣品中其他成分也可以吸附固相，極易產生背景過高或精確度下降。有些難於吸附固相的抗原也就不能用免疫PCR檢測，連接分子的特異性和均質性對PCR影響很大，PCR擴增過程相對簡單，如用微量板作為固相需選用配套的PCR儀，否則需將其移入反應管內，這必然導致很大的誤差，經放大可產生顯著差異。IPCR具有廣泛的應用前景，但有必要進一步完善IPCR的實驗過程和配套試劑的研製。

抗體類藥物免疫原性檢測不僅僅是藥物治療效果的問題，更是藥物安全性的問題，人們對抗抗體的副作用目前仍不明確。但抗抗體產生對藥物本身的影響以及潛在的過敏反應不容忽視，因此對抗體類藥物免疫原性檢測的工作需要不斷研究。

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