固定液黏度不宜太高。高效低黏度的液相固定液擴散係數大，反應速度快，色谱色譜柱效能高。高效同時還要選用對紫外光不敏感的液相化合物。常用反相液液分配色譜法的色谱固定液有C₁₈、C₈、高效苯己基、液相五氟苯基等；正相的色谱有NH₂基、CN基。高效反相鍵合固定相多為矽烷化鍵合，液相有單鍵、色谱三鍵之分。高效

液液分配色譜法現已廣泛采用化學鍵合固定相。液相它是色谱借助於化學反應合成方法將有機分子以共價鍵形式，通常為單分子層連接在載體上。化學鍵合固定相突出的優點是耐流動相衝洗，熱穩定性好，在很大程度上減弱了固定相表麵的活性位點。現代高效液相色譜法主要使用3類填料製作色譜柱，一是超純矽膠載體色譜柱，屬於高密度鍵合相，分析對象廣泛；二是親水性化合物專用色譜柱，屬於矽膠低密度鍵合相，適於分離強極性化合物；三是雜化顆粒色譜柱，耐高壓，pH 1～12，不僅用於高效液相色譜(HPLC)，更適於超高效液相色譜(UPLC)。在反相高效液相色譜法中，農藥殘留分析廣泛使用的固定相是C₁₈。C₈也是常用的一種，它更適於分析極性強一些的農藥品種，如磺酰脲類除草劑。

手性同定相(chiral stationary phase，CSP)仍然是今後液相色譜法固定相的研究方向，因為約25％的農藥品種具有手性對映體，加之手性對映體的活性、降解代謝和殘留特點存在著差異。目前商品化的手性色譜柱還難以滿足要求，手性固定相有配體交換型固定相、環糊精型手性固定相、高聚物手性固定相、蛋白質手性親和固定相等。

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