參考國標GB5009：28-2016一般性食品中樣品提取時間，本試驗對不同類別的添加糕點進行加標試驗來考察樣品提取時間對目標成分提取效率的影響，考察的剂含究提取時間分別為5min、10min、量测理方20min、定及30min、前处40min、法优50min、化研60min，糕点稱取糕點、中种月餅、添加辣條樣品各3份，剂含究精密加入混合標準使用液2.0mL，量测理方上機測定，定及得到4組分在不同提取時間的含量，結果見表2。結果顯示，超聲提取10min，4種目標組分的數值基本達到穩定，提取時間為20min所得含量最高，本次試驗最終選擇超聲時間為20min。
參考相關文獻，本次試驗考察蛋白沉澱劑(亞鐵氰化鉀溶液和乙酸鋅溶液)加入量對不同類別糕點在4組分中的影響，蛋白沉澱劑加入量分別為0mL、lmL、2mL、3mL、5mL，再沉澱1mL，因找不到同時含有這4組分的陽性樣品，故試驗采用的是陰性樣品加標試驗進行考察，稱取糕點、月餅、辣條樣品各3份，精密加入混合標準使用液2.0mL，按樣品(無奶油蛋糕或麵包、辣條、月餅)2g於50mL具塞離心管中，加5％乙醇(含1％氨水)提取，50℃超聲20min，冷卻至室溫，加219g/L亞鐵氰化鉀、106g/L乙酸鋅溶液各2mL，渦旋混勻，於10000r/min離心5min，上清液轉移至50mL容量瓶，殘渣再提取一次，合並2次濾液，定容至刻度。
取15mL提取液，加10mL正己烷，渦旋5min，離心後，吸取下層過濾上機分析製備供試品溶液，上機測定，計算4組分在不同蛋白沉澱劑加入量所得含量，從表中可以看出，沉澱劑加入量對月餅影響最大，對辣條影響次之，對糕點影響最小，沉澱劑以加入各2mL為宜，對於加入沉澱劑後的提取液還渾濁的樣品，可以在提取液中再加入各lmL沉澱劑，不會對結果造成顯著差異。
本次試驗采用正己烷萃取1次、正己烷萃取2次、PRiMeI-ILBSPE柱三種淨化方式對不同類別糕點4組分加標含量測定結果的影響，蛋白沉澱劑(亞鐵氰化鉀溶液和乙酸鋅溶液)加入量對不同類別糕點在4組分中的影響，蛋白沉澱劑加入量分別為0mL、lmL、2mL、3mL、5mL，再沉澱1mL，因找不到同時含有這4組分的陽性樣品，故試驗采用的是陰性樣品加標試驗進行考察，稱取糕點、月餅、辣條樣品各3份，精密加入混合標準使用液2.0mL，按樣品(無奶油蛋糕或麵包、辣條、月餅)2g於50mL具塞離心管中，加5％乙醇(含1％氨水)提取，50℃超聲20min，冷卻至室溫，加219g/L亞鐵氰化鉀、106g/L乙酸鋅溶液各2mL，渦旋混勻，於10000r/min離心5min，上清液轉移至50mL容量瓶，殘渣再提取一次，合並2次濾液，定容至刻度。
取15mL提取液，加10mL正己烷，渦旋5min，離心後，吸取下層過濾上機分析製備供試品溶液，上機測定，計算4組分在不同蛋白沉澱劑加入量所得含量，從表中可以看出，沉澱劑加入量對月餅影響最大，對辣條影響次之，對糕點影響最小，沉澱劑以加入各2mL為宜，對於加入沉澱劑後的提取液還渾濁的樣品，可以在提取液中再加入各lmL沉澱劑，不會對結果造成顯著差異。上機測定，結果見圖2，對大部分樣品而言，正己烷萃取1次可降低樣品基質效應，使樣品檢出含量變大，正己烷萃取2次，則會帶走目標物質，PRiMeHLB小柱，對目標組分存在吸附，試驗最終選擇正己烷提取1次。
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